hrvatski

Uspostava stabilnih klonova stanica CAL 27 koji konstitutivno ispoljavaju mutirani oblik gena nm23-H2

Gen nm23 je prvi je otkriveni supresor metastaziranja. Do danas je otkriveno osam članova ove obitelji, a većini je zajedničko obilježje da posjeduju aktivnost nukleozid-difosfatske kinaze. Nukleozid-difosfatska kinaza prenosi fosfatnu skupinu s ATP-a na sve ostale nukleozid-difosfate preko histidina na poziciji 118. Pored ove dokazane funkcije protein Nm23-H2 ima i nekoliko drugih biokemijskih funkcija u stanici. Cilj našeg rada bio je stvoriti sustav za proučavanje promjena do kojih dovodi pojačana ekspresija mutiranog oblika gena nm23-H2 (pojačana ekspresija gena s mutacijom u aktivnom mjestu enzima). Subkloniranjem odsječka cDNA gena Nm23-H2-H118 iz vektora pEGFPN1, preko T-vektora pBluescript II SK (+/-), u ekspresijski vektor pcDNA3, prilikom čega smo slijedu gena dodali reporterski slijed myc te tako stvorili pcDNA3-nm23-H2-H118N. Takav vektor pogodan je za stabilnu transfekciju stanica u kulturi. Metodom lipofekcije unijeli smo načinjeni vektor u stanice karcinoma pločastog epitela jezika, CAL 27. Nakon odabira stabilnih transfektanata pomoću geneticina te potvrdom ektopične ekspresije gena nm23-H2H118N Western blot analizom, uspostavili smo nekoliko stabilnih klonova za daljnja istraživanja.

nm23-H2; stabilna transfekcija; lipofekcija

nije evidentirano