hrvatski

Bakulovirusi

Bakulovirusi su najčešći virusi pronađeni u kukaca. Za heterolognu gensku ekspresiju najčešće se koristi Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV). Bakulovirusni sustav za ekspresiju heterolognih gena koristi se onda kada su za smatanje funkcionalnog proteina potrebne post-translacijske modifikacije, stvaranje disulfidnih veza i oligomerizacija, na način kako se to događa u stanicama sisavaca. Rekombinantni bakulovirusi konstruiraju se homolognom rekombinacijom nakon kotransfekcije u stanice kukca Sf9. Homologna rekombinacije se događa između tzv. transfer vektora u kojem se odabrani gen nalazi između 5' kraja gena za β -galaktozidazu i 3' kraja gena potrebnog za replikaciju virusa, i replikacijski defektne, linearne bakulovirusne DNA. Homolognom rekombinacijom se nadomješta defekt u replikacijski defektnom bakulovirusu, sklapa se funkcionalni gen za β -galaktozidazu i istovremeno ugrađuje željeni gen. Razvijeni su i jednostavniji sustavi za konstrukciju rekombinantnih bakulovirusa u kojima se bakulovirusna DNA konstruira u plazmidu koji se umnaža u E. coli. Na tržištu je prisutno više kompleta za konstrukciju bakulovirusa za heterolognu ekspresiju, te stoga u ovoj knjizi opisujemo samo osnovne metode uzgoja, izdvajanja plakova i ekspresije. Kod upotrebe kompleta za konstrukciju bakulovirusa potrebno je željeni klonirati u transfer vektor, te stoga upućujemo čitaoce na poglavlje 7.1. o kloniranju u plazmidni vektor.

DNA virus, insekti

nije evidentirano