hrvatski

Konstrukcija vektora pH7WG2, 0-deltaITEP za funkcionalnu analizu domene ITEP proteina TROL iz biljke Arabidopsis thaliana (L.) Heynh

Sekvencioniranje biljnog genoma vrste Arabidopsis thaliana olakšalo je identifikaciju gena te ispitivanje uloga i interakciju njihovih produkata. gen At4g01050 koji kodira protein TROL, smješten je na četvrtom kromosomu A. thaliana. ovaj protein sadrži jednu domenu nalik rodanazi, koja bi mogla imati ulogu u regulaciji fotosinteze te karboksi terminalnu hidrofobnu domenu (nazvanu ITEP) čija se uloga treba ispitati. Dokazano je da protein Tic62 sadrži tri domene koje su homologne sa domenon ITEP. Obzirom da te domene interagiraju sa proteinom FNR, pretpostavljamo da bi to mogla biti potencijalna uloga domene ITEP. Kako bi ispitali ovu pretpostavku, klonirala sam cDNA gena At4g01050 bez domene ITEP (nazvan delta ITEP) u Gateway destinacijski binarni vektor i njime transformirala bakterije Agrobacterium tumefaciens. Proces kloniranja izvršen je pomoću Gateway tehnologije jer ona zaobilazi potrebu za tradicionalnim kloniranjem pomoću ligaza. Ova tehnologija se bazira na rekombinacijskom sustavu lambda bakteriofaga sa specifičnim mjestima, gdje dolazi do izmjene sekvenci između plazmida koji nose kompatibilna rekombinacijska mjesta. Uzgojene bakterijske kolonije će se koristiti za transformaciju mutiranih biljaka vrste A. thaliana i kasniju ugradnju delta ITEP u biljni genom. Postupak in vivo komplementacije mogoa bi otkriti moguću ulogu domene ITEP.

at4g01050; FNR; Gateway

nije evidentirano