hrvatski

Kloniranje gena koji kodira za lipolitički enzim iz bakterije Streptomyces coelicolor

U ranijim radovima kloniran je i analiziran lipolitički enzim iz bakterije Streptomyces rimosus, koji je svrstan u grupu bakterijskih lipaza iz GDSL – porodice serinskih hidrolaza. Bioinformatičke analize aminokiselinskog slijeda te evolucijski i biotehnološki zanimljive lipaze pokazale su značajnu homologiju s jednim hipotetičkim proteinom čiji je nukleotidni slijed pronađen određivanjem primarne strukture genoma bakterije Streptomyces coelicolor. Gen koji kodira za hipotetički protein iz bakterije Streptomyces coelicolor je umnožen s Pfu DNA polimerazom i s Taq DNA polimerazom, te su oba produkta u sustavu za direktno kloniranje PCR produkta (TA kloniranje) uklonirana u bakteriju Escherichia coli. Dosadašnjim analizama primarnih struktura DNA ukloniranih fragmenata nisu pronađeni klonovi koji ne sadrže mutacije, no pozicija delecija ukazuje na postojanje stabilne sekundarne strukture na 5' – kraju lipaznog gena. Umnažanjem s Taq DNA polimerazom dobiven je klon koji ima dvije mutacije od kojih je jedna tiha, dok druga mijenja aminokiselinu koja je konzervirana kod druge dvije lipaze.

lipaza ; Streptomyces coelicolor ; kloniranje

nije evidentirano