hrvatski

Kloniranje gena za histidinima obilježen protein koji se veže na jednolančanu DNA i njegova ekspresija u bakteriji Streptomyces lividans

Proteini koji se vežu na jednolančanu DNA (proteini SSB) imaju fundamentalnu ulogu u njenom metabolizmu kod prokariota i eukariota te su proučavani dugi niz godina. Fosforilacija proteina SSB donedavano je bila otkrivena samo kod eukariota gdje se fosforiliraju serinski i treoninski aminokiselinski ostaci dok su najnovija istraživanja pokazala da se fosforilacija proteina SSB odvija i u prokariotskim sustavima, a fosforiliraju se tirozinski aminokiselinski ostaci. Jedan od bakterijskih rodova kod kojih je dokazana fosforilacija SSB jest rod Streptomyces. Fosforilacija streptomicetnog proteina SSB dokazana je u heterolognom sustavu, što znači da je nakon unošenja gena za SSB iz bakterije S. coelicolor, plazmidnim vektorom u bakteriju Escherichia coli iz nje uspješno izoliran fosforilirani SSB. Ovaj rad je dio istraživanja kojemu je cilj dokazati fosforilaciju proteina SSB u homolognom sustavu te njenu ulogu u staničnoj replikaciji i popravku. Tijekom provedenog istraživanja kloniran je gen ssb, izoliran iz bakterije S. coelicolor s modificiranim 5'- krajem na koji je dodan nukleotidni slijed za šest histidina. Načinjena su dva konstrukta koji se razlikuju jedino po mjestu vezanja ribosoma. Konstrukt koji na 5'-kraju ima ribosomsko mjesto vezanja specificno za E.coli transformiran je u bakteriju S. lividans iz koje je uspješno izolirana manja količina histidinom obilježenog proteina SSB.

SSB; kloniranje; tirozinska fosforilacija

nije evidentirano