hrvatski

Kultura neurona P19-model za istraživanje neurotoksičnog učinka glutamata

Visoke koncentracije glutamata (glavne ekscitacijske aminokiseline u mozgu sisavaca) toksične su za neurone i povezuju se s nastankom i progresijom brojnih akutnih i kroničnih neurodegenerativnih bolesti. Cilj našeg istraživanja bio je uvesti u laboratorij postupak dobivanja neurona P19 te utvrditi da li ova kultura može poslužiti kao model za istraživanje toksičnog učinka glutamata. Stanice P19 (pluripotentni teratokarcinom miša) nakon indukcije s retinoičnom kiselinom diferencirali smo u miješanu kulturu neurona, fibroblasta i astrocita. Imunoflorescencijskim obilježavanjem utvrdili smo da neuroni P19 eksprimiraju beta-III tubulin što upućuje na njihovo potpuno sazrijevanje. Metodom RT-PCR utvrdili smo u terminalno diferenciranim neuronima P19 transkripte podjedinice NR1, NR2A i NR2B receptora NMDA, kao i alfa1, beta2 i gama2L podjedinice GABA-A receptora. Bojenjem tripanskim modrilom i mjerenjem aktivnosti LDH utvrdili smo da kratkotrajna primjena glutamata djeluje citotoksično na neurone P19. Učinak glutamata dokinuli smo u prisutnosti MK-801, selektivnog antagonista receptora NMDA. Dobiveni rezultati upućuju na zaključak da P19 neuroni eksprimiraju funkcionalne receptore NMDA i da se mogu koristiti kao pouzdan model za proučavanje neurotoksičnog učinka glutamata.

neuroni P19; diferencijacija; beta-III tubulin; ekspresija podjedinica; glutamat; neurotoksičnost; NMDA receptor; MK-801

nije evidentirano