hrvatski

Aktivnost apoptoznih i upalnih kaspaza u NCI-H292 stanicama tretiranim izvanstaničnim Hsp70

Izvanstanični protein toplinskog šoka Hsp70 (eng. heat shock protein 70) povišen je u krvi osoba s različitim upalnim stanjima i bolestima, poput kronične opstrukcijske plućne bolesti (KOPB) [1]. Za razliku od unutarstaničnog Hsp70 proteina koji djeluje citoprotekcijski i protu-upalno, smatra se da izvanstanični Hsp70 djeluje preko receptora sličnih Toll receptorima Drosophila vrste TLR2 i TLR4 (eng. Toll like receptor) izazivajući sterilnu upalu [2]. Upala i stanična smrt (poput apoptoze) značajni su stanični procesi koji kontroliraju homeostazu organizma. Poremećaj bilo kojeg od ova dva procesa može dovesti do razvoja bolesti. Stoga je za razumijevanje mehanizama bolesti važno razjasniti na koji način se procesi upale i stanične smrti mogu kontrolirati te također koje je njihovo međusobno djelovanje. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati aktivnost apoptoznih kaspaza -3/7, -8 i -9 te upalne kaspaze-1 u NCI-H292 stanicama kao staničnom modelu KOPB-a. Hipoteza istraživanja je da izvanstanični Hsp70 može inducirati upalne procese, no ne nužno i stanično umiranje procesom apoptoze. NCI–H292 stanice tretirane su s 0, 3, 1 i 3 g/mL humanog rekombinantnog Hsp70 proteina s niskim sadržajem endotoksina (rhHsp70) tijekom 2, 4, 6 i 8 sati. Aktivnosti kaspaza -1, -3/7, -8 i -9 određene su luminescentnom metodom (Caspase-Glo assay), a rezultati su izraženi u relativnim jedinicama svjetlosti RLU (eng. relative light units). Istraživanje je pokazalo da rhHsp70 nije utjecao na aktivaciju apaptoznih kaspaza -8 i –9, no sve testirane koncentracije značajno su inhibirale aktivnost kaspaza-3/7 nakon 2 h: 979, 00 ± 9, 00 RLU, P = 0, 0107 ; 1005, 00 ± 29, 00 RLU, P = 0, 0146 i 1033, 00 ± 18, 00 RLU, P = 0, 0209 za 0, 3, 1 i 3 μg/ml rhHsp70 u odnosu na netretirane kontrolne stanice (1292, 00 ± 63, 00 RLU). Upalna kaspaza-1 nije aktivirana u navedenim vremenima pri tretiranju s rhHsp70. Zaključujemo da rhHsp70 ne postiže upalno djelovanje putom aktivacije inflamasoma i kaspaze-1, te ne uzrokuje apoptozu. Štoviše, rhHsp70 ima protu-apoptozno djelovanje koje vrši na način da inhibira kaspaze-3/7.

izvanstanični Hsp70, kaspaze, apoptoza, upala, NCI - H292

nije evidentirano