hrvatski

Prilagodba neenzimske metode s Ellmanovim reagensom za određivanje glutationa u tkivima štakora

Najvažniji neenzimski antioksidans je glutation (GSH) – tripeptid glutamata, cisteina i glicina. U organizmu ima višestruke uloge od kojih su najbitnije detoksikacija ksenobiotika i antioksidativna obrana reproduktivnih organa. Kao stanični biomarker, vrlo je značajan u identificiranju oksidativnog stresa u organizmu. Razvijene su mnoge metode za njegovo određivanje, a najpoznatije su enzimske metode po Ellmanu. U ovom radu prilagođavala se metoda čija je osnova neenzimska reakcija s Ellmanovim reagensom, a koja je prikladna za izvođenje u jednostavnim laboratorijskim uvjetima i s manjim brojem uzoraka. Količina GSH u uzorku određivala se spektrofotometrijski. Potvrđena je izvrsna linearnost u mjernom području do 200 nmol, a preciznost višekratnim mjerenjima više uzoraka unutar pokusa (%v = 2, 47– 4, 23%) i između pokusa (%V = 1, 27– 3, 08%). Točnost metode provjeravala se metodom dodatka standarda u uzorke tkiva štakora s iskorištenjem od 97– 103% te metodom promjene volumena dodanog uzorka. Određena je količina GSH u tkivu testisa (2, 98± 0, 104 nmol GSH/mg tkiva), epididimisa (1, 54± 0, 104 nmol GSH/mg tkiva) i prostate (0, 99± 0, 100 nmol GSH/mg tkiva). Ispitani su uvjeti čuvanja supernatanta tkiva štakora i utvrđeno je da čuvanjem pri – 20 ^0C ne dolazi do značajnih promjena količina GSH u supernatantu tijekom 21 dana.

glutation; neenzimsko određivanje GSH; epididimis; prostata; testis

nije evidentirano