hrvatski

Utjecaj supstrata na stabilnost enzima aldolaze

U ovom radu je proučavana reakcija aldolne adicije dihidroksiacetona na N-Cbz-3- aminopropanal (aldehid) katalizirana aldolazom (FSA A129 S) dobivenom iz genetski modificirane Escherichie coli. Ispitan je utjecaj N-Cbz-3- aminopropanala na početnu brzinu reakcije aldolne adicije, te je ispitan utjecaj ovog aldehida na stabilnost enzima. Rezultati pokazuju da povećanjem koncentracije aldehida dolazi do porasta početne brzine reakcije, te da ne dolazi do inhibicije supstratom. Stoga su ovi podaci opisani Michaelis- Menteničinom kinetikom, te su procijenjene vrijednosti kinetičkih parametara modela. Kinetički parametri ukazuju na visoku aktivnost aldolaze (Vm), te na slab afinitet enzima prema ovom supstratu (velika vrijednost Km). Inkubacijom aldolaze pri različitim koncentracijama aldehida (0, 20, 250 mM) pokazano je da ovaj aldehid nema negativan učinak na stabilnost enzima. Tijekom vremena inkubacije je praćena aktivnost enzima pomoću enzimskog testa, te su iz ovisnosti aktivnosti enzima o vremenu procijenjene konstante deaktivacije enzima prvog reda. Enzim je pokazao najmanju stabilnost u čistom puferu gdje je procijenjena najviša vrijednost konstante deaktivacije. Povećanjem koncentracije aldehida nije došlo do povećanja konstante deaktivacije, već je u svim slučajevima ona bila približno jednaka.

aldolaza ; metoda početnih brzina ; Michaelis-Menteničina kinetika

nije evidentirano