engleski

Isolation ADH from yeast cells

Dehidrogenaze su enzimi koji za svoje katalitičko djelovanje trebaju tzv. „slobodni“ koenzim, a koji se ponaša kao drugi supstrat u katalitičkoj reakciji [1]. Ovi biokatalizatori se upotrebljavaju za dobivanje kiralnih produkata kao npr. amino kiselina [2] ili alkohola [3], iz nekiralnih prekursora. Da bi se koenzim koristio ekonomično i uspješno u biokatalitičkoj reakciji, te da bi se reakcijska ravnoteža pomicala u smjeru nastajanja produkta, potrebno je koenzim in situ regenerirati. U literaturi [1] je opisan čitav niz metoda regeneracije koenzima, a u ovom radu je upotrebljena metoda regeneracije pomoću dodavanja ko-substrata u reakcijski medij. Kao ko-substrat je upotrebljen aceton. Provedene su dvije reakcije: oksidacija etanola i oksidacija heksanola. Kao biokatalizator je upotrebljena alkohol dehidrogenaza (YADH) izolirana iz pekarskog kvasca, koja za svoju katalitičku aktivnost treba koenzim: nikotinamid-adenin-dinukleotid NAD(H). Enzim je izoliran prema metodi opisanoj u literaturi [4] i kinetički karakteriziran metodom početnih brzina. Na temelju eksperimentalnih podataka su za njega metodom nelinearne regresije procijenjeni parametri. Prema procijenjenim kinetičkim parametrima može se zaključiti da reakcijski produkti acetaldehid odnosno heksanal značajno inhibiraju reakcijsku brzinu odnosno djeluju kao inhibitori enzima. Koristeći eksperimentalne podatake, napravljen je formalni kinetički model i model šaržnog reaktora. Pomoću modela je oponašan proces u šaržnom reaktoru, te je procijenjena količina potrebnog biokatalizatora za provedbu reakcije. Eksperimentalni rezultati provedbe biokatalitičke oksidacije etanola i heksanola dobro se slažu sa rezultatima oponašanja procesa pomoću modela, što upućuje na valjanost modela i procjenu kinetičkih parametara. Oksidacije etanola i heksanola su provođene u reaktoru volumena 40 mL, pri temperaturi 30 oC i pH 8, 8 u 0, 1 M pirofosfatnom puferu.

alcohol dehydrogenase; baker's yeast; isolation

nije evidentirano